Doug (Jack Black) og Griff (Paul Rudd) har vært bestevenner siden barndommen, og hatt én absurd drøm: å gjenskape sin store favorittfilm, den «klassiske» Anaconda. Når midtlivskrisen innhenter dem, bestemmer de seg for å realisere drømmen, og reiser dypt inn i Amazonas for å starte innspillingen. Men drømmen blir til mareritt når en ekte gigantisk anaconda dukker opp, og det komisk kaotiske filmsettet utvikler seg til en kamp for ren overlevelse.